柱子的清洗和再生 [匿名](2006-7-20 15:14:51)1.柱子的清洗
即使样品和流动相已做过前处理,也仍难以完全避免柱子受到污染,因此必须对柱子行清洗。清洗应定期进行,如果在短期内分析许多样品,则以每日清洗一次为宜,至少也应一周一次,防止有太多的杂质在柱上堆积。
反相柱的常规洗涤办法是:分别取甲醇、三氯甲烷、甲醇一水各20倍柱体积(即对于一根4.6mm×25cm的柱来说,通常是50—60ml,而对于9.4mm×50cm的柱来说,通常是500--600m1),使之通过柱子。然后用流动相平衡(通常仍用20倍柱体积),柱一般将恢复正常。如果选择性仍和以前不一样,则表明还有其他杂质留在柱子里,这时应考虑更加严格的清洗:先用20倍柱体积的水,再用相同体积的0.05mol/L硫酸,最后用流动相溶剂、酸洗常能洗下有机溶剂所不能洗下的剩余杂质;在低pH值下做长期清洗是不适宜的,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般对键合相没有损害。注意,强碱不能用来清洗任何微粒硅胶柱(不论是键合相还是非键合相),因为硅胶骨架会溶解。对于严重污染的反相柱只能采用再生的方法。
2.柱头孔隙的处理
拆下不锈钢烧结过滤器后,检查柱床,常可见柱头塌陷,此时先剔掉无规则床层和带色填料,使柱床呈白色并完全水平,再用甲醇作糊状填料匀浆液,将填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复数次,直到水平,完成了柱的再生。此时,如果柱头孔隙深度小于lcm,可以采用下述局部重装的办法,否则,柱应当完全重装或更换。
柱入口局部重装时采用的填料可以和原填料一样,也可用玻璃珠。粒径大于20um的可用敲打充填法干装。如果粒径小于20um则要用合适的溶剂配成匀浆,匀浆逐次加入,每次加入前都要使上一次加入的全部沉降。把孔隙填满后,用刮刀将填料刮平,更换柱入口接头,把柱重新接到液相仪器上,慢慢地增加流动相流速和系统压力,直到操作上限为止。让相当于10—20倍柱体积的流动相通过柱子,然后逐渐降低流速,并使压力降为零,再把柱子卸下来,并卸下入口接头,观察柱的入口。此时孔隙应当减小,但是由于新加入的填料在系统的操作压力下压入柱头,孔隙不可能一次就被全部充满。重复上述重装过程,直到柱上加不进更多的填料为止。一旦柱子填充完毕,可加进混合样品,测定柱子的性能是否已经改善。
3.柱再生
色谱柱使用一段时间后,柱效将会下降,必须进行再生处理。再生处理包括活化(自右向左)和净化(自左向右)两种。
◆ 硅胶、氧化铝和极性(正相)键合相色谱柱可以采用以下程序再生:
三甲基戊烷或己烷-三氯乙烷-乙酸乙酯-丙酮-乙醇-水采用上述溶剂依次以1m1/min的流速通过色谱柱,洗脱量约为20 m1。然后反方向重复上述过程。
◆ 反相色谱柱常用甲醇、水作流动相,有时还可能含有控制PH值的盐、酸或离子型溶质。对硅胶或以硅胶为基质的键合(或离子交换)填料,为避免硅胶溶解,PH值不应超过8.5。再生时将25ml纯甲醇及25ml甲醇(1:1)混合液依次通过色谱柱淋洗,然后用所选的流动相平衡。
.1. 回复:柱子的清洗和再生 [匿名](2006-8-1 8:36:59)收下了!:) .2. 回复:柱子的清洗和再生 ~爱斯特(2006-8-15 17:19:21)我的柱子每天都清洗,但现在压力越来越高,清洗也无效,是不是柱子该换了?可我的柱子,只用了三个多月啊 [返回] |